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翻译我的方法(HPLC↔uhplc)

指示

ACD / LABS与经验丰富的色谱师Patrik Petersson和MEL EUERBY合作,提供了转化液相色谱方法的应用。只需填写下面的方法信息,将HPLC方法转换为UHPLC,反之亦然(适用于任何类型的分析梯度色谱)。

比较功能ACD / Labs色谱软件(ACD /方法选择套件和ACD / AUTOCHROM)中的ACD / LABS的方法翻译工具以及此免费软件工具

翻译工具中的功能 免费软件 ACD / Labs Chrom软件
梯度时间的缩放和流量和注射体积的几何缩放
> 9个时间点
EXP DEAD和DWELL VOLUMES的用户输入
停留批量补偿
在面包车中击中Optima的流量缩放
压力估计和警告
溶剂消耗量
Rs.的变化
重新平衡估计和警告
基于粒子和柱尺寸的死卷估计
估计停留量
缩放缩放量以补偿过载
计算线性速度
L / DP的计算
仪器和列参数-
原版的 新缩放 新选择
流动(ml / min)
流量缩小柱尺寸(ml / min)。典型的大分子 0.20
列i.D.(毫米) 2.1
粒径(μm) 3.4
柱长(mm) 283.
注射体积(UL) 9.4 5.0
死体积(ml)
居住量(ml)
停留时间(分钟) 2.88 2.88
L / DP. 83,333.3.3.3. 83,333.3.3.3. 44,117.6.
为了获得准确的翻译,建议使用实验确定的死亡和停留体积。有关潜在陷阱的综合描述以及如何避免它们可以在“P.Petersson,M.R. Euerby和M.A.詹姆斯,不同形式的液相色谱形式的翻译:优点,原则和可能的陷阱,LCGC.,2014年3月提交了“。
典型的住所估计
联盟 1.40毫升
Acquity UPLC“Classic”,具有50μL混合器 0.10毫升
Acquity UPLC“Classic”,带385μL混合器 0.44毫升
Acquity H类,带100μl混合器 0.38毫升
Acquity H类,带250μL混合器 0.53毫升
NB检查H-Class扩展循环大小,即添加50,100,250或1000μL以上的体积
Dionex RSLC. 0.56毫升
安捷伦1100. 1.22毫升
Agilent 1260在低停留音量配置中。 0.29毫升
Agilent 1290在低停留音量配置中二进制 0.20毫升
低停留体积配置中的Agilent 1290四季 0.57毫升
有关准确的翻译,建议测量欧洲药典7.0,2.2.46中所述的停留量。这仅是某种仪器模型和配置的一次。
梯度时间表-
原版的 数字列卷 新的选择未达到停留量差异 新的选择补偿了停留量差异
渐变步骤 T.G1.(分钟) %B. T.G1.F1/ V.M1 T.G2.(分钟) %B. T.G3.(分钟) %B.
0. 0.00 27.00
1 0.00 0.00 27.00
2 18.18 25.69 65.00 25.69 65.00
3. 18.24 25.77 90.00 25.77 90.00
4. 20.00 28.26 90.00 28.26 90.00
5. 0.00 0.00 0.00 0.00
6. 0.00 0.00 0.00 0.00
7. 0.00 0.00 0.00 0.00
8. 0.00 0.00 0.00 0.00
9. 0.00 0.00 0.00 0.00
10. 0.00 0.00 0.00 0.00
开始重新平衡 27.00 20.06 28.34 27.00 28.34 27.00
停止重新平衡 27.00 26.06 36.82 27.00 36.82 27.00
停留量警告 注意:为了补偿停留或死体积差异,在梯度开始后必须X min进行样品的注入。 x = 0.41min
在水域设备上,使用Solvent Manager MISC预注射器卷命令设置为Yμl。 Y =83μl.

使用方法翻译的提示和提示

检查列表以获取潜在问题。

通常,翻译在相对保留时间中具有可接受的偏差。但是,有可能导致选择性差异的潜在问题:

  • 编程错误 - 仔细检查输入此表和LC仪器方法。
  • 住所卷是错误的 - 检查欧洲药典7.0,2.2.46中所述的实际停留体积。这仅是某种仪器模型和配置的一次。
  • 由于柱背压的差异,在柱中产生的摩擦热将存在差异。如果从UHPLC转换为HPLC(例如+2,+4,+ 8℃)以模拟摩擦热(或反之亦然),则可以在许多情况下通过评估温度的增加来补偿许多情况下进行补偿(或反之亦然)。
  • 已经描述了涉及带电和中性分析物混合物的分离的压力诱导的选择性差异。这很难弥补。
  • 当介绍某些列的子2μm列时显示不同粒径之间的选择性差异。今天这不太问题。难以弥补。
  • 仪器设计的差异也可以引入选择性差异。
  • 特别是柱温恒温器是一个潜在的问题,因为已经观察到供应商的大差异甚至模型到来自同一供应商的模型。
  • 在许多情况下可以通过评估温度的增加或降低(例如,+ 2,+4,+ 6c)来补偿。
  • 不同的LC系统在喷射器中具有不同的喷射原理和材料。这可能导致与吸附相关的非线性。
  • 在翻译方法的验证中,必须确认维护/充分的选择性和线性度。还强烈建议推出一种系统适用性测试,允许柱子恒温器差异的补偿。
  • 关于潜在陷阱的更全面的描述以及如何避免它们在“P.Petersson,M.R. Euerby和M.A:詹姆斯,不同格式的液相色谱形式之间的翻译:优势,原则和可能的陷阱,LCGC,2014年3月提交”